益母草含量检测

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益母草

别名茺蔚、坤草，是一种草本植物。性微寒，味苦辛，可去瘀生新，活血调经 ，利尿消肿，是历代医家用来治疗妇科疾病之要药。

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  据现代临床及动物实施证明，益母草浸膏及煎剂对子宫有强而持久的兴奋作用，不但能增强其收力，同时能提高其紧张度和收缩率。益母草全草含益母草碱(Leonurine)约0.05％(花初期含微量，花中期逐渐增高)，水苏碱(stachydrine)，芦丁(rutin)，延胡索酸(反丁烯二酸fumaric acid)，益母草碱甲和益母草碱乙。细叶益母草全草含生物碱0.05％。

从化学结构上看，盐酸益母草碱和盐酸水苏碱由于含有较多的极性基团(-OH、-NH2、-COOH)和孤对电子，水溶性特别强，因此普通的C18反相色谱柱已不能满足此类化合物的分析要求，重要的原因即亲水性成分在C18柱上没有保留。

                                                                      盐酸益母草碱 结构式                                   盐酸水苏碱 结构式

推荐：艾杰尔Venusil stachydrine色谱柱，首支进入《中国药典》2010 年版的国产亲水作用色谱柱

艾杰尔Venusil stachydrine色谱柱

盐酸水苏碱专项色谱柱专为分析益母草中盐酸水苏碱而设计。该产品是以硅胶为基质，键合相由于采用了中性的酰胺基团，在亲水作用色谱模式下对强极性、水溶性碱性有机化合物有很好的选择性。

​​HILIC是一种亲水作用色谱模式，其洗脱是以化合物亲水性/极性增加的次序排列，提高流动相中有机相的比例会增加溶质的保留，典型的流动相是乙腈（40%--97%）/水（或挥发性缓冲盐），同时它可以使用更高挥发性的流动相或缓冲盐，方便了与质谱检测器和蒸发光检测器的联用。

益母草中盐酸水苏碱分析及图谱

参照2015版中国药典一部益母草含量测定项下的色谱条件：
以丙基酰胺键合硅胶为填充剂

以乙腈-0.2%冰醋酸溶液（80:20）为流动相，蒸发光散射检测器检测。要求理论塔板数以盐酸水苏碱计算应不低于6000。

色谱柱：Venusil stachdrine
规格：5μm，4.6*250mm 
订货号：VH952505-LH
流动相：乙腈︰0.2%   冰醋酸溶液=80︰20（v/v）
流速：0.5 mL/min
柱温：20°C
检测器：ELSD（蒸发光散射检测器）
进样量：10μL 

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注：如需订购，请在化工平台网上搜索厦门广晟达仪器设备有限公司，进行选型订购。

结论：

本实验采用键合有丙基酰胺固定相的水苏碱专柱Venusil stachdrine，根据2015版中国药典一部益母草含量测定项下的色谱条件，色谱柱保留效果良好，理论塔板数以盐酸水苏碱计算为15203>6000，能够满足检测要求。

色谱柱：Venusil stachdrine使用和​维护

防护

在连接和使用色谱柱时要注意安全，佩戴手套、口罩和防护镜，任何原因（管路连接不紧、管路老化、PEEK头老化）导致的溶剂和样品泄露直接接触到操作人员，都会对操作人员的健康产生影响。

使用方向

色谱柱在使用过程中要保持流动相方向和色谱柱标示的箭头方向一致，如无特殊情况，不建议反向使用（如为清洗色谱柱前柱头的污染物时，可考虑低流速反向冲洗）

活化

新的盐酸水苏碱专柱出厂时柱体中的液相为乙腈，在储存和运输过程中柱体可能会出现短暂干涸，故新柱*使用前需使用大于20倍柱体积的乙腈以0.5mL/min的流速进行活化后再选择实验所需的操作条件进行平衡，如果实验所需的流动相中含缓冲液，需使用与流动相等比例的有机相和水进行过渡，避免出现盐析现象。

样品前处理

为了避免样品或流动相中的微粒杂质对色谱柱前筛板造成堵塞，实验所用的所有试剂和样品在使用前都应使用0.45μm或0.22μm的微孔滤膜进行过滤。对于基质较复杂的样品，推荐使用SPE固相萃取系统进行前处理。

流动相和样品pH

为了使色谱柱获得更佳的寿命和效果，请遵循厂家建议的pH范围内使用，盐酸水苏碱专柱pH适用范围为2.0-6.0，pH过高会使硅胶溶解，pH过低会导致部分或全部的键合相脱落，出现柱性能下降，造成实验结果不重现。

流动相和样品溶剂

应避免流动相在高有机相体系下使用与有机相不互溶的磷酸盐或其他缓冲盐，避免由于盐析损坏色谱柱。为不干扰HILIC分离机制，不要使用三氟二酸和其他离子对试剂。如果可能，请尽量选择流动相溶解样品，不要使用水或DMSO溶解样品，避免出现溶剂效应导致的峰型变差。

柱温和压力

最大操作温度应低于60℃，长期在高温下使用（＞60℃）会损坏色谱柱，这种情况在Ph>6.0时表现明显。色谱柱可承受400Bar的压力，但长期处于高压状态会影响色谱柱的性能和使用寿命，正常操作使用时建议柱压应低于200Bar。

保护柱

在进行基质较复杂的样品分析时，为使色谱柱获得更好的寿命，建议在色谱柱前使用保护柱，阻挡系统中的微粒和延缓样品对固定相的化学污染。

冲洗程序

色谱柱使用完毕后需依次使用50%乙腈、5%乙腈、100%乙腈以0.5mL/min冲洗至少20倍柱体积，如果柱前有连接保护柱，需与色谱柱断开分别进行冲洗。

储存

储存色谱柱时，不要有水或缓冲液留在色谱柱中，可使用乙腈作为色谱柱的封存溶剂。长期不用的色谱柱为了防止柱床干涸，建议定期对色谱柱进行冲洗，冲洗完毕用堵头塞紧色谱柱的两